其次,影片在人物角色上也有了新的突破和发展。除了系列中已经深入人心的老面孔外,影片还加入了许多新鲜血液。其中最引人注目的就是杰森·莫玛饰演的但丁,他不仅是唐老大失散多年的兄弟,也是一个拥有超凡技能和野心的飙车高手。他与唐老大之间既有亲情纠葛又有利益冲突,他与飞车家族之间既有合作可能又有敌对危机。他给整个故事增加了很多悬念和冲突,也给观众带来了很多惊喜和刺激。此外,影片还邀请了许多知名明星客串出演,如布丽·拉尔森、皮特·戴维森、盖尔·加朵、道恩·强森等等。他们虽然出镜时间不长,但都给人留下了深刻印象。值得一提的是,《忍者神龟:变种大乱斗》引入前所未见的变种军团,可谓脑洞大开惊喜连连。除最强反派超级苍蝇外,更有牛头洛克斯代迪、猪面比博、壁虎蒙多、忍者蛙、皮头、激光鱼等一大波猎奇有趣、搞怪秀逗的变种生物来袭,堪称“变种”盛宴,必将令观众大饱眼福。其中,超级苍蝇是他们的领导者,他战力爆棚无恶不作,但是内心深处却渴望得到人类的认可,只是过分的欲望让他误入歧途。设定这样一个性格丰富且有一定矛盾性的反派角色,也将让故事的发展更具看点。正如导演杰夫·罗韦所说:“在这部电影中,我们想要另一个变种角色去当反派,我们需要一个能和忍者神龟建立联系、而忍者神龟也能与之产生共鸣的人物,他们之间需要有更多层面的故事,这正是超级苍蝇这个角色能赋予我们的。”